Differenzierung humaner neuraler Vorläuferzellen auf Beschichtungen mit Polydopamin und Collagen: Differenzierung humaner neuralerVorläuferzellen auf Beschichtungen mitPolydopamin und Collagen
Differenzierung humaner neuraler Vorläuferzellen auf Beschichtungen mit Polydopamin und Collagen: Differenzierung humaner neuralerVorläuferzellen auf Beschichtungen mitPolydopamin und Collagen
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Bibliografische Beschreibung Name: Elena Wolfram Titel: Differenzierung humaner neuraler Vorläuferzellen auf Beschichtungen mit Polydopamin und Collagen Institut: Medizinische Fakultät der Universität Leipzig, Dissertation zur Erlangung des akademischen Grades doctor medicinae (Dr.med.) 85 Seiten, 9 Abbildungen, 7 Tabellen, 194 Quellen Der Morbus Parkinson gehört zu den häufigsten neurodegenerativen Erkrankungen. Forschungen auf dem Gebiet der Zelltransplantation können einen vielversprechenden kurativen Ansatz aufzeigen. Im Interesse dieser Promotion standen die Generierung von dopaminergen Neuronen aus humanen neuralen Vorläuferzellen (hNPC) und die Untersuchung des Einflusses der extrazellulären Matrixproteine (EZM) Polydopamin (PDA) und Collagen auf diese. Aufgrund begrenzter Ressourcen und ethischer Bedenken im Hinblick auf die Gewinnung humaner neuraler Vorläuferzellen aus Embryonen war eine Steigerung der Genese dopaminerger Neuronen in vitro für eine Etablierung der Zelltransplantation als Behandlungsmethode notwendig. In dieser Promotionsarbeit wurde das Standardprotokoll für die Kultivierung humaner neuraler Vorläuferzellen durch Zugabe von PDA, Collagen I (Cl) und Collagen II (CIl) in unterschiedlichen Kombinationen ergänzt. Die verwendeten EZM wurden aufgrund ihrer bekannten Anhaftungseigenschaften ausgewählt, um ein gleichmäßig adhärentes Wachstum der hNPCs am Kulturflaschenboden zu erreichen. Die Untersuchungen auf Transkript- und Proteinebene zeigen, dass eine Kombination der Standardbeschichtung aus Poly-L-Ornithin/Fibronectin (PLO/FN) mit PDA sowie PDA als Monobeschichtung die dopaminerge Genese der hNPCs nicht steigern konnte. Eine niedrige Konzentration an PDA in den Beschichtungen führte zu einem nichtadhärenten Wachstum der hNPCs und zur Ausbildung von Spheres. Höhere Konzentrationen an PDA hatten ein adhärentes Wachstum der Zellen in clusterförmigen Anordnungen zur Folge. Auf den Beschichtungen mit PLO/FN und Cl sowie Cll ohne den Zusatz von PDA zeigte sich eine signifikant höhere Expression des dopaminergen Markers Thyrosinhydroxylase (TH) in den Analysen durch ICC und Westernblot. Cl und Cll führten in Kombination mit der Standardbeschichtung PLO/FN zu einem gleichmäßig adhärenten Wachstum. Eine Kombination von PDA, Cl und Cll sowie der Standardbeschichtung PLO/FN führte nur unter Verwendung von höheren Konzentra- tionen PDA zu einem adhärenten Wachstum, eine Steigerung der dopaminergen Diffe- renzierung konnte nicht beobachtet werden.